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禽liu感病毒H7N9亞型(AIV-H7N9)核酸PCR試劑盒

描述:禽liu感病毒H7N9亞型(AIV-H7N9)核酸PCR試劑盒是上海臻科生物科技有限公司的產(chǎn)品,靈敏度好,準(zhǔn)確性高,現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎廣大新老客戶前來選購(gòu)。

更新時(shí)間:2024-07-05
產(chǎn)品型號(hào):50T
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
詳情介紹

【產(chǎn)品名稱】禽liu感病毒H7N9亞型(AIV-H7N9)核酸PCR試劑盒

【包裝規(guī)格】 50T/盒

【產(chǎn)品方法】雙重實(shí)時(shí)熒光PCR法

【預(yù)期用途】

適用于禽liu感病毒H7N9亞型(AIV-H7N9)檢測(cè),可用于臨床禽liu感病毒H7N9亞型(AIV-H7N9)感染的輔助診斷,但不作確診使用。

禽liu感病毒H7N9亞型(AIV-H7N9)核酸PCR試劑盒【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用TaqMan 探針法實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù),設(shè)計(jì)一對(duì)禽liu感病毒H7N9亞型(AIV-H7N9)特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,利用相應(yīng)儀器對(duì)PCR 過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析,用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【主要組成成份】

反應(yīng)液、酶液、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【保存和運(yùn)輸】上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸, 嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】 

1 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1樣本前處理 

血液、體液和棉拭子樣本取100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用核酸提qu或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進(jìn)行核酸提取,請(qǐng)按照試劑說明書進(jìn)行操作。

2.試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū)) 

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽性對(duì)照;反應(yīng)管 數(shù)每滿 10 份,多配制 1 份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

RP反應(yīng)液

酶液

用量(樣本數(shù)為N)

20μL

1μL

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到PCR 反應(yīng)管中,21μL/管。

3.加樣(樣本處理區(qū)) 

將步驟1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短 暫離心。

4.PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為25μL; 熒光通道選擇: 檢測(cè)通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時(shí)間

收集熒光信號(hào)

1

1cycle

42℃

20min

2

1cycle

95℃

10min

3

40cycles

94℃

15sec


55℃

30sec

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定 

設(shè)置Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像 調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性:檢測(cè)通道Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線; 可疑:檢測(cè)通道 35值≤38,建議重復(fù)檢測(cè),如果檢測(cè)通道仍為 35值≤38,且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線, 判定為陽性,否則為陰性; 陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

 陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無 Ct 值顯示; 陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

7.檢測(cè)方法的局限性 

1. 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

3. 陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

4. 病原體在流行過程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

5. 不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

6.試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果; 7.本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

【注意事項(xiàng)】

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,完quan混勻并短暫離心;

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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